Como identificar una bacteria

Contenido

• etapas
• Método 1 Identifica una bacteria por tinción de Gram
• Método 2 Realice la prueba de tinción de Ziehl-Neelsen
• Método 3 Estudie el comportamiento y la apariencia de las bacterias.
• Método 4 Interpreta todos los resultados

En este artículo: Identifique una bacteria mediante tinción de Gram Realice la prueba de tinción de Ziehl-Neelsen Estudie el comportamiento y la apariencia de las bacterias Interprete todos los resultados43 Referencias

La identificación de bacterias es una tarea compleja. Una de las razones es que, según las estimaciones, ¡hay entre 10 000 y 1 billón de especies bacterianas en el mundo! Identificar adecuadamente las bacterias es muy importante, especialmente en el campo médico, donde el tratamiento adecuado de una enfermedad depende en gran medida del tipo de microbio que está causando el problema. En la mayoría de los casos, la identificación se realiza sobre la base de la eliminación. Para identificar una bacteria, debe realizar pruebas de tinción, analizar su apariencia y observar cómo responde bien a diferentes condiciones. Si necesita un resultado rápido, tome una muestra de ADN para enviarla a un laboratorio.

etapas

Método 1 Identifica una bacteria por tinción de Gram

1. determinar Si las bacterias son Gram positivas o negativas. La tinción de Gram es un método para dividir las bacterias entre los dos tipos más comunes: Gram positivo y Gram negativo. Los primeros tienen una pared celular gruesa que consiste en un polímero llamado peptidoglicano, que tiene la mejor tinción que las paredes delgadas de las bacterias Gram negativas.
   • Algunos tipos comunes de bacterias grampositivas son estreptococos, estafilococos, micrococos (o micrococos) y listeria.
   • Estos son algunos ejemplos comunes de bacterias gramnegativas: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium y Campylobacter.
2. Tomar las medidas de protección adecuadas. Las bacterias y los elementos químicos que usará durante la prueba representan un riesgo para su salud. Use gafas de seguridad, guantes desechables de nitrilo y una bata de laboratorio cuando realice la prueba de tinción. Una vez que haya terminado, ponga los guantes y todos los demás materiales contaminados en una bolsa especial. Recuerde seguir los procedimientos de su laboratorio para deshacerse de la bolsa de productos contaminados.
3. Ponga la muestra para observar en un portaobjetos de vidrio. Para comenzar la prueba, coloque una gota o muestra bacteriana en un portaobjetos estéril. Luego, deslice la cuchilla sobre un mechero Bunsen encendido tres veces para fijar la muestra y evitar que salga de la placa cuando enjuague o agregue los reactivos.
4. Agregue 5 gotas de cristal morado a la cuchilla. Vierta cinco gotas de una solución de cristal violeta sobre la muestra. Espere un minuto a que la muestra absorba el cristal violeta.
   • Sostenga la cuchilla en su lugar con alfileres para que no se manche las manos.
5. Lave bien la cuchilla para eliminar la mancha. Use un grifo o una botella de presión y deje que el agua corra muy lentamente durante hasta cinco segundos para eliminar los residuos de tinta que no se hayan adherido a la muestra.
6. Vierta cinco gotas de una tinción de diodo de Gram en el portaobjetos. Es una solución que consiste en diodo, bicarbonato de sodio y dioduro de potasio que hace que el cristal violeta se derrita con las paredes celulares de las bacterias. Vierta cinco gotas de la solución sobre la muestra y deje actuar durante un minuto.
7. Lave la muestra con alcohol o ácido láctico. El alcohol y la lacetona son agentes blanqueadores y eliminarán las manchas de las paredes celulares bacterianas si son Gram-negativas. Vierta unas gotas de lejía sobre la muestra y deje que funcione por no más de tres segundos. Después de eso, intente enjuagar suavemente con agua durante cinco segundos para eliminar estos agentes blanqueadores.
   • Si permite que el blanqueador funcione durante mucho tiempo, puede provocar la desaparición de la tinción de bacterias Gram-positivas, lo que resulta en un falso negativo.
8. Realice una prueba de contraste con safranina. La safranina es un tinte rojo que contrasta con el cristal violeta y, por lo tanto, colorea las bacterias sin que se vean afectadas por las manchas de color púrpura. Vierta unas cinco gotas de safranina sobre la muestra y deje actuar durante un minuto. Después de eso, intente enjuagar suavemente con agua durante cinco segundos.
9. Visualice su muestra con un aumento de 1000X. La bacteria se volverá púrpura o púrpura si es Gram positiva, o rosa si es Gram negativa debido a la safranina.

Método 2 Realice la prueba de tinción de Ziehl-Neelsen

1. Use esta técnica para detectar bacterias ácido-rápidas. Estas especies contienen una mayor cantidad de lípidos, haciéndolos más resistentes a los colorantes utilizados en la tinción de Gram. Las bacterias resistentes a los ácidos pertenecen al género Mycobacterium, que incluye la bacteria responsable de la tuberculosis (M. tuberculosis). Para teñir una bacteria resistente a los ácidos, debe usar un tinte rojo llamado fucsina carbólica, resistente al enjuague con soluciones de ácido ácido o sulfúrico.
2. Tomar las medidas de protección adecuadas. Los materiales químicos y biológicos utilizados durante la tinción de Ziehl-Neelsen pueden ser peligrosos. Además, también deberá usar fuentes de calor, como una boquilla Bunsen, un calentador eléctrico o una lámpara de alcohol. Siga las instrucciones a continuación para realizar la prueba.
   • Póngase gafas, guantes de nitrilo y una bata de laboratorio.
   • Tenga cuidado de no inhalar vapores de colorantes y blanqueadores y no permita que las gotas salpiquen sus ojos o piel. Mantenga los contenedores abiertos debajo de una campana.
   • Tenga mucho cuidado al calentar la cuchilla. La mayoría de los productos químicos utilizados son inflamables. También puede haber rastros de sustancias inflamables en los portaobjetos u otros equipos.
3. Prepara la cuchilla. Con movimientos circulares, esparza uniformemente una pequeña cantidad de la muestra bacteriana en el centro de un portaobjetos estéril. Su muestra debe ocupar unos 10 mm por 20 mm.
4. Seca la cuchilla. Coloque la cuchilla sobre la estructura de secado con la muestra hacia arriba. Deja que se seque naturalmente durante 30 segundos. No intente secar la cuchilla con un paño.
5. Asegure la muestra con calor. Con la muestra hacia arriba, deslice la cuchilla dos o tres veces sobre un mechero Bunsen encendido. También puede colocar la cuchilla en un calentador eléctrico ajustando la temperatura entre 65 ° C y 75 ° C durante al menos dos horas. Tenga cuidado de no hervir ni quemar la muestra.
6. Agregue la fucsina carbólica a la cuchilla. Vierta varias gotas de esta solución en el portaobjetos. Vierta lo suficiente para cubrir completamente la muestra.
7. Calienta la cuchilla para fijar el tinte. Caliente el portaobjetos con cuidado sobre un mechero Bunsen o una lámpara de alcohol, con la muestra dirigida hacia arriba, o colóquelo sobre un calentador eléctrico. Caliente la cuchilla a 60 ° C o hasta que comience a liberar vapor. Deje que el tinte actúe durante cinco minutos.
   • Si está utilizando un calentador eléctrico, enciéndalo a 60 ° C. Si opta por la lámpara de alcohol o el mechero Bunsen, debe esperar ver humos.
   • Para mantener la cuchilla a la temperatura deseada durante cinco minutos, caliéntela de manera intermitente.
   • Tenga cuidado de no hervir, quemar o secar la muestra.
8. Enjuague la cuchilla con agua fría. Dejar enfriar durante cinco minutos y enjuagar suavemente durante unos segundos con agua limpia. Use agua del grifo o una botella exprimible para eliminar las manchas de tinte que no se hayan adherido a la muestra.
9. Vierta sobre la muestra de alcohol ácido o ácido sulfúrico. Use un volumen de alcohol al 3% por volumen (v / v) o ácido sulfúrico al 20% para cubrir completamente la muestra. Permita que el ácido trabaje hasta que el color se desvanezca y alcance un tono rosado muy brillante. El proceso generalmente toma unos diez minutos.
10. Use agua limpia para enjuagar la cuchilla. Lave suavemente la cuchilla con un grifo o con una botella de presión. Elimine bien todos los residuos de ácido y tinte.
11. Añadir el agente de contraste. Una vez que haya enjuagado el portaobjetos, vierta el tinte de verde de malaquita o azul de metileno. Estas dos soluciones crean un fondo azulado o verdoso en el que emergerá el tinte rojo, así como otros materiales biológicos, como las células humanas y las bacterias no resistentes a los ácidos. Deje que las sustancias trabajen durante uno o dos minutos.
12. Enjuague y seque la cuchilla. Enjuague bien con agua para eliminar el exceso de contraste. Una vez que haya terminado, seque la parte posterior de la cuchilla con un paño seco y deje que se seque naturalmente en un soporte.
13. Visualice su muestra con un aumento de 1000X. Las bacterias resistentes a los ácidos se volverán rojas o rosas oscuras. Otras bacterias, células no bacterianas y la base de la cuchilla se volverán verdes o azules.

Método 3 Estudie el comportamiento y la apariencia de las bacterias.

1. Analiza la forma de la bacteria. Después de realizar la prueba de tinción para determinar si las bacterias son Gram-positivas, Gram-negativas o resistentes a los ácidos, es hora de identificar las especies con mayor precisión. Primero, analice la forma de las bacterias en el portaobjetos. Las tres formas más comunes son cocos (esféricos), espirales y bacilos (forma de varilla).
   • Hay varias variantes de estas formas. Las bacterias de forma redonda (coccus), por ejemplo, pueden aparecer en pares (diplococos), en cadenas, en montones o en grupos de cuatro (tétradas).
2. Averigüe si la bacteria es aeróbica o anaeróbica. Tome dos muestras de bacterias y cree dos cultivos separados. La luna debe ser anaeróbica (cultivada sin oxígeno), mientras que la otra debe ser aeróbica (cultivada con oxígeno). Almacene el cultivo anaeróbico a 35 ° C en un lugar libre de oxígeno durante al menos 48 horas antes de observar el crecimiento.
   • Si las bacterias crecen en un ambiente sin oxígeno, pero no cuando se exponen al oxígeno, significa que son anaeróbicas.
   • Aunque se desarrollan en un ambiente oxigenado, pero no en ausencia de oxígeno, son aeróbicos.
   • Cuando se desarrollan en ambos entornos, hablamos de bacterias anaerobias facultativas.
3. Realizar una prueba de motilidad. Una bacteria es móvil si puede moverse sola con uno o más flagelos. El grado de motilidad es muy importante en la identificación de ciertas especies bacterianas. Existen varios tipos de motilidad, pero la forma más segura y legible es el medio semisólido.
4. Crea una cultura para la prueba de motilidad. Prepare un cultivo de bacterias en un caldo de cultivo. Siga las instrucciones a continuación para preparar el caldo de su elección.
5. Inocular el cultivo en un agar semisólido para pruebas de motilidad. Cubra una porción del caldo de cultivo con una aguja de inoculación estéril. Coloque cuidadosamente la aguja en el tubo de dagar semisólido, como el lagar TTC, que ha preparado para la prueba. La aguja debe penetrar 2/3 del agar.
   • Cuando termine, retire con cuidado la aguja, teniendo cuidado de no exceder los límites de la zona de inoculación.
   • Incubar el tubo a 30 ° C durante 48 horas.
6. Lee el resultado de la prueba. El agar para la prueba de motilidad se pondrá rojo en contacto con bacterias. Si son móviles, este tinte rojo o rosado se extenderá por toda la sustancia. De lo contrario, la tinción se limitará al sitio de la inyección.

Método 4 Interpreta todos los resultados

1. Reúne tus comentarios. Para conocer el tipo de bacteria, deberá recopilar la información obtenida de los cultivos, las pruebas de coloración y la observación de las formas. Si está examinando las muestras de un paciente, los síntomas que presentan también pueden ayudar a determinar el tipo de bacteria que es apropiada.
   • Por ejemplo, si las pruebas muestran que la bacteria es gramnegativa, anaeróbica, no móvil y nota síntomas como dolor abdominal, náuseas y vómitos en el paciente, es probable que el paciente sufra de infección por Bacteroides. fragilis.
2. Consultar una base de datos. Hay miles de especies de bacterias en el mundo. Es imposible saberlo todo de memoria. Es probable que deba consultar un libro de microbiología clínica o una base de datos en línea para comparar los resultados de las pruebas con información sobre especies bacterianas.
   • Existen excelentes recursos en línea para identificar bacterias, pero la mayoría de estas bases de datos están disponibles en inglés, incluidos Patricbrc.org y GlobalRPh. Sin embargo, aún puede encontrar información útil en el sitio web del Centro Internacional de Recursos Microbianos de INRA.
3. Haga una prueba genética para conocer las especies exactas de la bacteria. En algunos casos, es posible que deba identificar las especies de bacterias. El método más rápido y fácil es realizar una prueba de ADN. Las pruebas de ADN también son útiles para identificar bacterias resistentes a las formas tradicionales de tinción y cultivo. Hoy en día, las pruebas de ADN en microorganismos son muy rápidas y pueden estar listas en menos de dos horas.
   • Si no tiene acceso a un laboratorio que realiza la secuenciación genética de microorganismos, envíe una muestra bacteriana a una agencia especializada.